1. Nguyên tắc
- Phương pháp sử dụng đĩa cấy vi sinh môi trường khan và gel ẩm nước hòa tan. Mẫu kiểm tra pha loãng đã được thêm vào đĩa với 01 tỉ lệ là 1ml/đĩa. Ấn miếng trải bằng nhựa đặt lên tấm film, trải mẫu đều khắp diện tích 20 cm2. Chất làm đông làm đĩa được đông lại, đĩa được ủ và sau đó đếm khuẩn lạc.
2. Phạm vi áp dụng
- Xác định Tổng số vi sinh vật hiếu khí trong tất cả các dòng sản phẩm Non Dairy Creamer.
3. Tài liệu tham khảo
- AOAC Official method 989.10 – Bacterial and Coliform Counts in Dariy Products – Dry rehyratable Film Methods
- TCVN 7923:2008
4. Dụng cụ và thuốc thử
- Đĩa Petrifilm Aerobic count
- Miếng trải bằng nhựa – dùng để trải mẫu đều khắp diện tích đĩa
- Cân kỹ thuật có độ phân giải 0.01g
- Pipets thể tích hút 1 ml
- Dung dịch đệm Peptone water vô trùng
5. Chuẩn bị test suspensions mẫu huyền phù
- Chuẩn bị dung dịch vô trùng với tỷ lệ 1:10 (11 g/ 99 ml dung dịch đệm pepton)
- Chuẩn bị thêm để pha loãng theo yêu cầu. Thông thường, pha loãng tỷ lệ 1:10 hay 1: 100.
6. Phân tích
- Lấy đĩa Petrifilm để trên bề mặt phẳng, kéo tấm film bên trên lên và cấy truyền 1 ml mẫu huyền phù lên trên trung tâm đĩa.
- Cẩn thận cuộn nhẹ tấm film bên trên xuống. Phân tán mẫu huyền phù khắp vùng tăng trưởng bằng cách ấn nhẹ trung tâm miếng trải bằng nhựa.
- Để yên đĩa trong 1 phút cho gel đông lại.
- Ủ đĩa ở 320C ± 10C trong 48 h ± 3 h.
- Trong tủ ấm, vị trí đĩa đặt nằm ngang, hướng thẳng lên, không chồng quá 20 đĩa.
7. Kết quả
- Có thể sử dụng kính lúp có đèn chiếu sáng đếm khuẩn lạc dể dàng.
- Đếm tất cả số khuẩn lạc màu đỏ riêng biệt.
- Tổng vi khuẩn hiếu khí trong 1g hay 1 ml mẫu:
A (CFU/g) = N*k
Trong đó:
- A: Số tế bào (đơn vị hình thành khuẩn lạc) vi khuẩn trong 1g hay 1 mL mẫu.
- N: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên đĩa (hay trung bình số khuẩn lạc trên đĩa nếu thực hiện 02 đĩa song song cùng 01 mẫu)
- k: Hệ số pha loãng mẫu