Phương pháp kiểm tra tổng số vi sinh vật hiếu khí

• AOAC Official method 989.10 – Bacterial and Coliform Counts in Dariy Products – Dry rehyratable Film Methods
• TCVN 7923:2008

• Đĩa Petrifilm Aerobic count
• Miếng trải bằng nhựa – dùng để trải mẫu đều khắp diện tích đĩa
• Cân kỹ thuật có độ phân giải 0.01g
• Pipets thể tích hút 1 ml
• Dung dịch đệm Peptone water vô trùng

• Chuẩn bị dung dịch vô trùng với tỷ lệ 1:10 (11 g/ 99 ml dung dịch đệm pepton)
• Chuẩn bị thêm để pha loãng theo yêu cầu. Thông thường, pha loãng tỷ lệ 1:10 hay 1: 100.

• Lấy đĩa Petrifilm để trên bề mặt phẳng, kéo tấm film bên trên lên và cấy truyền 1 ml mẫu huyền phù lên trên trung tâm đĩa.
• Cẩn thận cuộn nhẹ tấm film bên trên xuống. Phân tán mẫu huyền phù khắp vùng tăng trưởng bằng cách ấn nhẹ trung tâm miếng trải bằng nhựa.
• Để yên đĩa trong 1 phút cho gel đông lại.
• Ủ đĩa ở 320C ± 10C trong 48 h ± 3 h.
• Trong tủ ấm, vị trí đĩa đặt nằm ngang, hướng thẳng lên, không chồng quá 20 đĩa.

Có thể sử dụng kính lúp có đèn chiếu sáng đếm khuẩn lạc dể dàng.

Đếm tất cả số khuẩn lạc màu đỏ riêng biệt.

Tổng vi khuẩn hiếu khí trong 1g hay 1 ml mẫu:

A (CFU/g) = N*k

Trong đó:

• A: Số tế bào (đơn vị hình thành khuẩn lạc) vi khuẩn trong 1g hay 1 mL mẫu.                                   
• N: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên đĩa (hay trung bình số khuẩn lạc trên đĩa nếu thực hiện 02 đĩa song song cùng 01 mẫu)
• k:  Hệ số pha loãng mẫu